胚胎大鼠中枢神经系统神经干细胞分离培养方法研究

为了建立经济实用的神经干细胞培养方法,以wistar大鼠胚龄14～15天的胚胎为实验材料,选取中枢神经系统的大脑和小脑神经组织,经0125%胰酶消化处理,在生长因子(afgf和bfgf)作用下,采用无血清培养法进行培养。通过倒置相差显微镜进行观察,可观察到明显的干细胞的不对称分裂图像。神经干细胞在培养一段时间后均出现细胞团,细胞团贴壁后可进行分化,形态上表现为神经元样和神经胶质样细胞。利用激光扫描共聚焦显微镜对其进行鉴定,可检测到神经干细胞标志性蛋白—nestin蛋白。采用此法可以分离得到具有干细胞特征和多分化潜能的神经干细胞,建立了一套神经干细胞的分离、培养和鉴定的方法,这将对更好地理解神经系统的发育机制,及临床治疗神经系统疾病具有重要意义。