结核杆菌eis基因的克隆及其在耻垢分枝杆菌中的表达

目的:构建结核分枝杆菌eis基因的穿梭表达载体,鉴定其在重组耻垢分枝杆菌中的生物活性。方法:采用pcr技术克隆结核分枝杆菌eis基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pmv-eis,经酶切和测序鉴定其正确性,用电穿孔法将重组质粒转化至耻垢分枝杆菌mc2155中,采用sds-page和westernblot检测eis基因在耻垢分枝杆菌中的表达。结果:成功构建结核杆菌eis基因穿梭表达载体pmv-eis;生长曲线说明重组质粒不会影响耻垢分枝杆菌的体外生长;sds-page和westernblot检测证实eis在耻垢分枝杆菌中可表达出相对分子量约42kda的eis蛋白。结论:成功构建了eis基因穿梭表达质粒pmv-eis,且该重组质粒在耻垢分枝杆菌中具有生物活性,为下一步研究表达产物eis的功能奠定了一定基础。