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中国生物工程杂志 2010
人干细胞因子模拟肽与c-jun亮氨酸拉链融合蛋白的原核表达和生物学功能鉴定Keywords: 人干细胞因子,模拟肽,融合蛋白,亮氨酸拉链 Abstract: 将两种人干细胞因子(hscf)模拟肽(cs2和ls2)分别与c-jun亮氨酸拉链在大肠杆菌中融合表达,比较模拟肽与融合蛋白的生物学活性。通过搭桥pcr的方法,构建分别含有cs2和ls2与c-jun亮氨酸拉链融合蛋白及单独c-jun亮氨酸拉链编码序列的三种原核表达质粒pet30a-csj,pet30a-lsj和pet30a-jun,在e.colibl21中进行表达,经镍柱和sephadexg-50柱纯化后,sds-page和质谱法检测重组融合蛋白(csj,lsj)和c-jun的理化性质,mtt法检测融合蛋白刺激ut-7细胞增殖的活性。结果显示csj,lsj和c-jun在e.coli中均呈20%左右表达,经纯化后其纯度达95%以上,分子量分别为7336.08,7991.54和6672.74。细胞学活性实验显示:与cs2和ls2相比,csj和lsj促进ut-7细胞增殖的活性提高约1000倍。在大肠杆菌中成功表达了hscf模拟肽与c-jun亮氨酸拉链融合蛋白,融合蛋白活性显著高于合成的hscf模拟肽。
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