小鼠核糖核酸酶抑制剂的高效可溶性表达与氧化抗性鉴定

核糖核酸酶抑制剂(ribonucleaseinhibitor,ri)是一种细胞内能够调节核糖核酸酶活性的胞浆蛋白,在分子生物学涉及rna的实验中有广泛应用。商品化的小鼠ri(mri)宣称其可能具有较高的氧化抗性。为获得mri在大肠杆菌宿主中可溶性活性产物的有效重组表达,构建了含有mri编码基因的重组质粒载体,在几种不同工程菌中进行了mri蛋白的表达纯化,并观察了其氧化抗性特征。简单的组氨酸标签融合,即可在蛋白酶基因缺陷的bl21衍生的宿主菌中,经过适当诱导,获得较高水平活性产物的可溶性表达。纯化后产量在4~8mg/l水平,接近其他种属ri特殊优化表达系统的最高产量。该重组mri与重组人ri(hri)具有基本一致的核糖核酸酶抑制活性和抗氧化作用,与前人推测的抗氧化特征不同。