组织因子/活化凝血ⅶ因子复合物对大肠癌lovo细胞系表达基质金属蛋白酶-7的调控作用

？目的:观察活化凝血ⅶ因子(activedfactorⅶ,fⅶa)对大肠癌lovo细胞系表达基质金属蛋白酶-7(prommp-7)的影响,探讨其可能的组织因子信号转导通路.方法:(1)用westernblot检测100nmol/lfⅶa刺激lovo细胞系不同时间点及不同浓度fⅶa刺激lovo细胞系12h后细胞prommp-7蛋白水平;用westernblot检测5mg/l组织因子(tissuefactor,tf)抗体预孵育lovo细胞系0.5h后再给予100nmol/lfⅶa刺激12h后细胞prommp-7蛋白水平.(2)观察用100nmol/lfⅶa刺激时丝裂原激活蛋白激酶(mapks)各亚通路信号蛋白(包括细胞外信号调节激酶erk1/2,丝裂原激活蛋白激酶p38及c-jun-n末端蛋白激酶jnk)磷酸化水平变化.(3)在fⅶa刺激前0.5h分别加入erk1/2,p38和jnk信号通路特异阻断剂pd98059,sb203580和sp600125,培养12h后检测细胞prommp-7蛋白的变化.结果:(1)fⅶa可刺激lovo系细胞表达prommp-7并呈时间依赖性和剂量依赖性,在刺激的12h左右prommp-7达峰值,是正常对照组的5.5±0.6倍(p=0.006);用tf抗体预处理的lovo细胞系,其fⅶa上调prommp-7表达的作用被完全阻断.(2)用100nmol/lfⅶa刺激lovo细胞5min时,mapks磷酸化活性蛋白p-erk1/2和p-p38表达水平开始增加,至10min时达峰值(分别为对照组的2.2±0.3倍和3.9±0.5倍,p值分别为0.02和0.01),存在时间效应关系,而p-jnk活性无改变(为对照组的1.1±0.1倍).(3)erk1/2通路阻断剂pd98059及p38通路阻断剂sb203580可部分减少fⅶa上调lovo细胞系表达prommp-7的效应,分别降低了32%±5%(p=0.01)和61%±10%(p=0.009),jnk通路特异性阻断剂sp600125对prommp-7的表达无明显影响.结论:fⅶa通过与lovo细胞表面的tf结合诱导prommp-7的表达,并呈时间依赖性和剂量依赖性;erk1/2和p38mapks亚通路参与lovo细胞tf信号转导通路并与tf/fⅶa调控prommp-7表达有关.