利用dna指纹图谱技术对健康女性阴道菌群多样性的分析

？目的：利用dna指纹图谱技术——变性梯度凝胶电泳(denaturinggradientgelelectrophoresis,dgge)分析我国育龄期及绝经期健康女性阴道菌群多样性，为了解各种下生殖道感染疾病状态下的微生态环境奠定基础，为研制适合恢复中国女性正常阴道微生态环境的微生态制剂提供依据。方法：选取2009年10月至2010年1月在北京大学第一医院妇产科门诊常规体检的健康女性（其中育龄期30例、绝经后30例）为研究对象。采集阴道分泌物，提取细菌总dna，采用通用引物对细菌16srdna基因的v3区进行扩增,将pcr产物进行变性梯度凝胶电泳,通过对dgge特征条带切胶回收并进行克隆测序，利用genbank中的blast与已知序列比对，鉴定细菌菌种,分析不同生理状态下阴道菌群的多样性。结果：（1）我国育龄期健康女性阴道常见菌种为：卷曲乳杆菌（lactobacilluscrispatus）、惰性乳杆菌（lactobacillusiners）和加氏乳杆菌（lactobacillusgasseri），其中惰性乳杆菌是以往通过传统培养方法尚未认识到的阴道优势菌种。（2）绝经期健康女性阴道菌种与育龄期不同且复杂，常见菌种有：惰性乳杆菌、卷曲乳杆菌、大肠杆菌（escherichiacoli）、无乳链球菌（streptococcusagalactiae）、解没食子酸链球菌（streptococcusgallolyticus）、韦荣球菌属（veillonellasp.）、中间链球菌（streptococcusintermedius）、咽颊炎链球菌（streptococcusanginosus）、普雷沃氏菌属（prevotellasp.）、气球菌（anaerococcuslactolyticus）和脆弱拟杆菌（bacteroidesfragilis）。结论：通过dgge分析发现我国育龄期健康女性阴道常见优势菌种为：卷曲乳杆菌、惰性乳杆菌、加氏乳杆菌；绝经期健康女性阴道常见优势菌种为:惰性乳杆菌、卷曲乳杆菌、大肠杆菌、链球菌属、普雷沃菌属、脆弱拟杆菌以及产乳酸的韦荣球菌、气球菌属，并首次发现在不同生理状态下惰性乳杆菌均是阴道优势菌种之一。