幽门螺杆菌硫氧还蛋白-1基因克隆及其重组蛋白表达与活性测定

？目的：克隆幽门螺杆菌（helicobacterpylori,hp）硫氧还蛋白-1（thioredoxin-1,trx1）基因，构建含有该目的基因的原核细胞表达载体，表达纯化该蛋白，并检测该蛋白活性。方法：以hp国际标准菌株26695的总rna为模板，设计含有酶切位点的特异性引物，用逆转录pcr的方法扩增hptrx1的cdna，连接至peasy-t1载体构建成peasy-t1-hptrx1。对peasy-t1-hptrx1进行双酶切后将目的片段连接至pet-30a，形成pet-30a-hptrx1重组质粒，并在大肠杆菌bl21plyss中进行表达。应用镍柱亲和层析纯化重组的hptrx1蛋白，并检测其二硫键还原酶的活性。结果：测序结果显示hptrx1cdna成功连入pet-30a质粒，且与genbank（hp0824）完全一致。含质粒pet-30a-hptrx1的大肠杆菌bl21plyss成功表达出hptrx1蛋白，活性检测显示重组hptrx1蛋白具有二硫键还原酶的活性。结论：成功构建原核表达载体pet-30a-hptrx1，并表达、纯化出有活性的hptrx1蛋白，为进一步研究hptrx1的生物学活性及其对肿瘤发生的作用机制奠定了基础。