尿苷酶在丙型肝炎病毒逆转录-抗污染-联体聚合酶链反应中的应用

？目的:建立丙型肝炎病毒(hepatitiscvirus,hcv)逆转录-抗污染-联体聚合酶链反应(polymerasechainreaction,pcr),并优化尿苷酶(uracil-dnaglycosylase,udg)的抗污染剂量和抗污染时间.方法:逆转录-抗污染-联体pcr技术的第1次pcr实行逆转录-抗污染-pcr同步化;第2次pcr经分层蜡处理进行全程抗污染,并应用该技术扩增hcvcdna,制备全含脱氧尿嘧啶核苷酸(dutp)的dna(du-dna)为模板,作为udg实验室抗污染质控对照并验证该联体pcr检测hcvrna灵敏度,用dna-酶免疫测定技术检测hcvcdna.结果:抗污染实验结果证实,0.2u的udg在37℃和42℃40min均可达到抗污染的效果.对高浓度全du-dna模板也有良好的抗污染效果.灵敏度检验结果表明,用hcvrna浓度为2.110×105copies/ml的血清,稀释到10-4倍后仍可检测出hcvrna.结论:应用该逆转录-抗污染-联体pcr技术进行全程抗污染,减少了因程序中多次加样造成的污染,为hcv逆转录pcr(reversetranscription-pcr,rt-pcr)检测rna提供良好的防污染和抗污染操作技术.