酵母双杂交筛选雄激素受体辅助调节因子267-α(ara267-α)的相互作用蛋白

？目的:通过酵母双杂交系统筛选与雄激素受体辅助调节因子267-α(androgenreceptor-associatedcoregulator267-α,ara267-α)有相互作用的蛋白质,为研究ara267-α的生理功能寻找证据和方向.方法:以能表达ara267-α中4个phd(p1anthomeodomain)和1个set[su(var)3-9,enhancer-of-zeste,trithorax]结构域的pgbkt7-phd-set重组质粒为"诱饵",采用酵母融合(yeastmating)方法筛选预转化的人脑cdna文库.挑选阳性酵母菌落进行质粒提取、限制性内切酶分析和dna测序.将测序结果在genbank中进行核苷酸序列同源性比对,确定它们所对应的基因.通过再次酵母双杂交排除假阳性相互作用.结果:筛选cdna文库共获得约600个阳性酵母菌落,随机挑选其中的65个菌落提取混合质粒.经过在氨苄青霉素培养盘中筛选,共得到43个文库pact2-cdna质粒.选取35个酶切片段不同的文库pact2-cdna质粒进行测序,测序结果比对揭示,35个cdna插入片段来源于16种不同的基因.酵母双杂交证实其中ranbpm是ara267-d的假阳性作用蛋白.结论:通过筛选cdna文库发现ara267-α可以与多个不同的蛋白质相互作用,这提示ara267-α可能是一个具有多种生理功能的蛋白分子,而ranbpm极可能是一个转录因子.