抗人p185erbb2人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建表达及活性测定

？目的:her2/neu过度表达见于多种恶性肿瘤.作为肿瘤抗原,p185erbb2是一个理想的肿瘤治疗靶点.本实验在既往工作基础上,构建嵌合型抗p185erb2单克隆抗体(单抗)的真核表达载体,并在cho-dhfr-细胞中表达,从而降低鼠源性抗体的免疫原性,为进一步的应用研究奠定基础.方法:rt-pcr扩增p185erbb2单抗1-2的轻、重链可变区基因,插入嵌合抗体真核表达载体pwsd2中,脂质体转染cho-dhfr-细胞.经rt-pcr、间接elisa、westernblot检测人-鼠嵌合抗体的表达水平,用elisa、免疫沉淀方法对嵌合抗体的亲和力和特异性进行初步鉴定.此外,采用mtt比色法检测嵌合抗体对高表达p185erbb2的乳腺癌细胞系skbr3的生长抑制作用.结果:用rt-pcr、间接elisa、westernblot方法证明人-鼠嵌合抗体在cho-dhfr-细胞中表达;elisa检测提示嵌合抗体与高表达p185erbb2的细胞反应阳性,与低表达p185erbb2的细胞反应阴性;免疫沉淀结果表明嵌合抗体可与p185erbb2分子特异性结合;mtt比色法检测表明嵌合抗体对过表达p185erbb2的乳腺癌细胞skbr3的生长有抑制作用.结论:cho-dhfr-细胞表达的人-鼠嵌合抗体可与p185erbb2特异性结合,并可抑制高表达p185erbb2的肿瘤细胞生长,表明抗人p185erbb2人-鼠嵌合抗体具有肿瘤生物治疗的潜在应用价值.