活细胞硫化氢检测新方法

？目的：建立测定活细胞释放微量硫化氢（hydrogensulfide，h2s）的简易方法。方法：在细胞培养板盖上方黏附滤膜，细胞释放的硫化氢与滤膜上的醋酸锌反应产生硫化锌，采用亚甲基蓝分光光度法测定并计算细胞释放的硫化氢的量。应用该方法分别检测了hepg2细胞和人脐静脉内皮细胞硫化氢的释放量。结果：hepg2细胞添加l-半胱氨酸以及辅酶磷酸吡哆醛后，继续培养12h，h2s释放量为(859.39±19.12)nmol/(min·106cells)；给予胱硫醚-γ-裂解酶抑制剂炔丙基甘氨酸（dl-propargylglycine,pag）后，h2s产率下降到(341.34±105.90)nmol/(min·106cells)；胱硫醚-β-合酶抑制剂间羟胺处理后，h2s产率下降到(375.05±174.50)nmol/(min·106cells)；两种酶抑制剂联合使用后h2s释放量显著抑制，为(204.47±97.14)nmol/(min·106cells)。人脐静脉内皮细胞也可内源性产生h2s，huvec细胞h2s的释放量为(26.23±3.24)nmol/(min·106cells)，约为hepg2细胞产量的1/30。台盼蓝检测细胞活性大于95%，细胞生长状态良好，表明该方法无细胞毒作用，细胞可根据实验需要继续培养。结论：滤膜吸附法简便易行、实用可靠，可应用于活细胞释放硫化氢的测定。