纳米细菌对肾小管上皮细胞的损伤及晶体滞留的影响

？目的：研究纳米细菌（nanobacteria，nb）对hk-2细胞的损伤作用及机制，并探讨损伤后细胞与一水草酸钙（calciumoxalatemonohydrate，com）晶体粘附性的变化。方法：应用肾结石患者血清培养nb，免疫组化法对nb进行鉴定。实验分为4组：空白对照组、nb组、纳米级羟基磷灰石（nanogradehydroxuapatite，nhap）组和com组。hk-2细胞与各组作用物共同培养12、24h后进行形态学观察；培养6、12、24h后取培养液进行过氧化氢（h2o2）、ldh、mda含量测定，消化细胞并超声粉碎后进行na+/k+及ca2+/mg2+atp酶活性的测定；培养6、12、24h后各组分别加入com晶体，利用异硫氰酸荧光素-鬼笔环肽进行细胞荧光染色，于激光共聚焦显微镜下观察细胞与com晶体的粘附情况。结果：nb组、nhap组12h后出现细胞形态改变，刷状缘排列紊乱，胞浆、胞核松散，空泡形成；24h后线粒体肿胀，部分细胞核膜溶解、核仁消失，nb组核膜溶解细胞数量多于nhap组。nb组12、24hh2o2含量高于空白对照组、nhap组，6、24hmda含量高于空白对照组、nhap组，但nb组各时间点ldh含量与空白对照组、nhap组无明显差异。na+/k+atp酶活性在12h后，nb组、nhap组低于空白对照组，24h后，仅nb组低于空白对照组；ca2+/mg2+atp酶活性在12h后，nb组、nhap组低于空白对照组，24h后仅nb组低于空白对照组。12h后，nb组粘附com晶体数量较前增多，而com组还可见到部分晶体已进入细胞内；24h后，nb组与com组晶体粘附情况与12h相近。空白对照组与nhap组未观察到细胞与显著数量的com晶体粘附。结论：nb对共同培养的hk-2细胞造成损伤，损伤程度随作用时间加长而加重，并强于nhap，损伤过程中有脂质过氧化反应参与。nb损伤细胞后，细胞的晶体粘附性明显增强，随损伤作用时间的延长，细胞与一水草酸钙晶体的粘附量也会相应地增加；nhap损伤细胞后未对细胞的晶体粘附性产生显著影响。