类风湿关节炎滑膜细胞中白三烯b4诱导肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1βmrna表达的测定

？目的:探讨类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,ra)滑膜细胞中白三烯b4(ltb4)诱导肿瘤坏死因子α(tnf-α)和白细胞介素1β(il-1β)mrna表达的定量测定方法.方法:ra患者的滑膜细胞进行原代培养,加入外源性ltb4或者在lit存在的情况下,分别加入mk-886(5-脂氧合酶激动蛋白抑制剂)和苯丁抑制素(bestatin,lta4水解酶抑制剂),采用taqmanpcr来定量检测滑膜细胞中tnf-α和il-1βmrna水平的表达.结果:原代培养的ra滑膜细胞的基本tnf-α和il-1βmrna表达水平(tnf-α/gapdh和il-1β/gapdh),分别为0.02±0.00和0.16±0.01.当加入外源性的ltb410-9和10-8mol/l后,ltb410-9mol/l使tnf-αrna水平的表达增高了7倍,ltb410-8mol/l使tnf-αmrna水平的表达增高了15倍,ltb410-8mol/l使il-1βmrna水平增高了1倍.而加入lit刺激内源性的ltb4增高后,使tnf-α和il-1βmrna水平分别增高了145倍和12倍.在lit存在的情况下,加入ltb4合成抑制剂mk-886(1μmol/l,10μmol/l)后,使tnf-αmrna水平的表达分别下降15%和66%,il-1βmrna水平的表达分别下降了41%和71%.1100mg/l苯丁抑制剂使tnf-α和il-1βmrna水平表达分别降低了86%和79%.结论:ra滑膜细胞中ltb4可诱导tnf-α和il-1βmrna水平的表达,并有助于定量测定mrna表达水平.