大鼠mecp2基因的rna干扰有效序列筛选

？目的:以rnai技术寻找抑制大鼠mecp2基因表达的有效序列.方法:首先构建大鼠mecp2基因与红色荧光蛋白(rfp)的融合基因表达质粒,然后分别与针对大鼠mecp2基因的4个备选小干扰rna(sirna,smallinterferencerna)共转染hek293t细胞,构成外源基因系统,以此对于4个备选的sirna对大鼠mecp2基因的抑制有效性进行筛选.然后将筛选到的有效序列sirna转染自身表达大鼠mecp2基因的pc12细胞,以免疫荧光染色显示大鼠mecp2蛋白的表达情况,通过内源大鼠mecp2基因表达被抑制的情况验证所筛选序列的rna干扰有效性.结果:针对大鼠mecp2基因mrna918～936位核苷酸的sirna(序列:5′-gcugugaaggaaucuucua-3′)是对大鼠mecp2基因进行rna干扰的有效序列.此有效sirna序列所在的位置相当于大鼠mecp2基因第4外显子,推测可同时抑制大鼠mecp2α和大鼠mecp2β的表达.且此靶序列位于大鼠mecp2基因编码区,推测可同时抑制1.9kb和10kb的大鼠mecp2基因mrna的表达.结论:本研究为建立稳定的大鼠神经元mecp2基因表达敲低的神经细胞模型和研究脑发育过程中mecp2基因的功能打下了基础.