一个唐氏综合征下调表达基因片段的克隆、鉴定及细胞定位分析

？目的:克隆唐氏综合征(downsyndrome,ds)相关新基因,并对其进行组织表达谱和细胞定位分析,探索其在ds脑病变发生中可能参与的环节.方法:在分析前期基因芯片结果的基础上,选取在正常和ds胎儿大脑皮层中差异表达的表达序列标签(expressionsequencetags,est)ai480014,利用cdna末端快速扩增技术(rapidamplificationofcdnaend,race)对其进行末端延伸;利用多组织northern印迹技术分析其在组织中的表达谱和剪接体情况,用半定量rt-pcr进一步验证其组织表达谱的结果;通过细胞原位杂交技术,对其进行体外原代培养的混合胶质细胞表达定位分析;最后用半定量rt-pcr分析其在ds和正常胎儿脑皮层表达情况.结果:成功地将ai480014的3'端延伸232bp,得到一个3'端完整、长682bp的新基因片段(genbank序列号dq275636);northern印迹表明分析其在心、肝、脾、肾、脑组织均有表达,且在脑组织中的表达量最高,而在脑组织中又以额叶、海马的表达量最高,各组织无可变剪接体的存在;在混合培养的胶质细胞中检测到该基因的表达;dq275636染色体定位为5q14.结论:得到一个新基因片段(dq275636);其组织来源和在脑组织中的表达特性提示其可能参与ds脑病变发生的某个环节.