无辅助病毒hsv-1载体介导lacz基因在培养皮层神经元中的表达

？目的:探讨无辅助单纯疱疹病毒(herpessimplexvirustype-1,hsv-1)载体的包装及其介导lacz基因在体外培养神经元表达的作用,解决该载体系统在包装及体外培养神经元应用中的有关问题.方法:将一组含hsv-1基因组的粘粒以限制性内切酶pacⅰ酶切、纯化后,与含lacz和酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,th)及神经微丝(neurofilament,nf)嵌合启动子的hsv-1质粒dna在脂质体作用下,共转染2-2细胞;在34℃条件下培养72h,收获病毒颗粒.将含病毒颗粒的上清液,加入bhk细胞培养液中,继续培养24h后,加x-gal染液作用4h,观察表达lacz基因的蓝染细胞.取培养第3天的胚胎大鼠大脑皮层神经元,加入含病毒颗粒的培养液,过夜后更换新鲜培养液,分组继续培养1,7和14d,进行x-gal染色,光镜下观察.结果:包装形成的病毒颗粒感染bhk细胞,24h后可见表达lacz基因的蓝染细胞;感染培养第3天的皮层神经元,继续培养1,7和14d后均可见蓝染神经元.结论:无辅助病毒包装系统能够使含th-nf嵌合启动子的hsv-1载体形成有效的病毒颗粒,并且在体外培养神经元中持续稳定地表达外源基因,为在神经系统进行基因转移和基因功能研究提供了有效的工具.