肿瘤及胚胎组织特异表达蛋白65与低密度脂蛋白受体相关蛋白关联蛋白的结合

？目的:寻找与肿瘤及胚胎组织特异表达蛋白65(cancerandembryoexpressionprotein65,cep65)相互结合的蛋白分子,为研究cep65在肿瘤发生中的作用机制提供线索.方法:以cep65为诱饵蛋白,通过酵母双杂交方法,筛选人胚胎组织cdna表达文库.将获得的阳性克隆cdna片段分别克隆到原核和哺乳细胞表达质粒,通过gstpull-down和免疫共沉淀对相互作用蛋白作进一步验证.结果:筛选到能与cep65相互结合的低密度脂蛋白受体相关蛋白产关联蛋白(lowdensitylipoproteinreceptor-relatedprotein-associatedprotein1,rap).将分别在原核和哺乳细胞中表达的rap与cep65进行gstpull-down实验,结果显示,原核表达的gst-rap可以与his-cep65相互结合,而在哺乳细胞共表达的gst-cep65和myc-rap也能相互结合.结论:rap可以和cep65相结合,cep65有可能通过与rap相互作用,在肿瘤的浸润、转移及增生中发挥其功能.