以大肠埃希菌tolc蛋白为靶标的适配体的筛选及结构分析

？目的：筛选大肠埃希菌外排泵tolc蛋白的核酸适配体。方法：重组表达大肠埃希菌外排泵外膜蛋白tolc，利用指数富集的配体系统进化技术(stematicevolutionofligandbyexponentialenrichment，selex)从单链dna文库中筛选出一组能够特异性与其结合的核酸适配体。利用fitc荧光素标记技术检测每轮单链dna文库与靶蛋白的亲和力，直至亲和力的上升趋于饱和，将最后一轮筛选产物克隆测序，并用dnaman软件分析其二级结构。结果：经过12轮筛选，单链dna文库与靶标蛋白的亲和力趋向稳定，将第12轮筛选产物克隆测序，对获得的23个适配体进行分析。一级结构分析显示23个适配体并无共同的保守序列，但分别有3对和2对适配体序列完全一致。二级结构预测分析表明，茎环结构为适配体主要的结构形式，提示其可能是适配体与tolc蛋白蛋白特异性结合的基础。根据二级结构特点可将23个适配体分为4个家族，其中20号适配体与靶标蛋白亲和力最高。结论：成功利用selex技术筛选获得了特异结合tolc的高亲和力的核酸适配体,为大肠埃希菌耐药干预及机制研究奠定了基础。