造血干细胞来源的树突状细胞负载p53基因诱导对hmcc97肝癌细胞特异性杀伤

？目的:以p53基因转染cd34+造血干细胞采集物来源的树突状细胞(dendriticcell,dc),诱导dc产生特异性抗肝癌免疫,观察其对表达p53抗原肝癌细胞的杀伤效果.方法:采用化疗和集落刺激因子联合动员肝癌患者外周血造血干细胞,血细胞分离机采集cd34+造血干细胞,白细胞介素(interleukin-4,il-4)、粒-巨细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophagecolony-stimulating-factor,gm-csf)联合肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactorαtnf-α)刺激cd34+细胞分化为dc.通过脂质体转染的方法将携带人p53基因的质粒pegfp-c3/p53转染培养7d的dc,mtt法检测对不同人肝癌细胞hmcc97和hepg2的特异性杀伤效果.结果:经细胞冈子刺激诱导培养的dc具有典型的分枝状突起,高表达cd1a、cd11c、cd80、cd86和hla-dr分子.转染p53基因后可见到转染dc细胞表达绿色荧光蛋白,免疫荧光染色可见转染p53基因的dc发出红色荧光,而未转染dc无荧光表达.mtt法检测结果表明,p53基因转染后的dc可诱发特异性细胞毒性t淋巴细胞(ctl)反应,杀伤表达p53抗原的hmcc97细胞,p53基因转染组、空载体组和未转染dc组的杀伤率分别为(49.3±4.6)%、(25.4±4.1)%和(24.8±3.8)%,转染组与空载体组和未转染dc组间存在统计学差异(p<0.05).而对于不表达p53抗原的hepg2细胞,转染p53的dc诱导的ctl反应未能产生明显的杀伤作用,p53基因转染组、空载体组和未转染dc组的杀伤率分别为(30.8±4.6)%、(27.3±4.3)%和(28.5±5.1)%,3组间差异无统计学意义(p0.05).结论:p53基因转染cd34+造血干细胞来源的dc可诱导特异性ctl反应杀伤表达p53抗原的肝癌细胞,提示p53可能成为dc细胞免疫治疗的潜在靶点.