超顺磁性氧化铁短发夹rna双功能分子探针外转染卵巢癌细胞的最佳浓度

？目的：采用不同质量浓度的超顺磁性氧化铁短发夹rna(superparamagneticironoxide-shorthairpinrna,spio-shrna)分子探针转染卵巢癌skov3细胞，观察细胞形态，检测细胞的生物学行为，寻找最佳的转染浓度。方法：将铁浓度分别为5、15、30、45、75、100mg/l的探针转染skov3细胞后，采用荧光倒置显微镜观察探针进入细胞情况，普鲁士蓝染色及透射电镜观察细胞形态及细胞内铁颗粒，原子吸收光谱仪法测定细胞内铁含量，cellcountingkit8(cck-8）检测细胞活性，流式细胞术观察细胞凋亡，westernblot检测细胞内表皮生长因子受体（epidermalgrowthfactorreceptor，egfr）蛋白的表达，磁共振成像（magneticresonanceimaging，mri）检测细胞内信号强度变化。结果：在5~30mg/l铁浓度范围内，细胞摄取量随探针铁质量浓度增加而增大，当探针铁浓度为45mg/l时，进入细胞达到饱和，标记率接近100%；细胞活性随探针质量浓度的增加而降低，各实验组细胞活性分别为94.626%±1.050%、93.373%±1.180%、91.700%±3.122%、75.100%±4.362%、72.983%±3.233%、71.010%±2.910%，5、15、30mg/l组细胞活性未见明显下降，差异无统计学意义（p=0.475，p=0.226，p=0.068）；≥45mg/l细胞活性明显下降(p<0.001);探针浓度≥45mg/l时，探针对skov3细胞egfr蛋白表达抑制率明显增加，45mg/l组蛋白表达率为68.905%±3.510%，与5、15、30mg/l组相比差异具有统计学意义（p<0.001，p=0.001，p=0.003，p均<0.01）；mri显示随着探针质量浓度增加，细胞信号强度逐渐降低，45mg/l组细胞信号强度为165.55±4.92,信号强度明显降低，45mg/l组与空白组（相同体积的磷酸盐缓冲液）、正常细胞组（未标记的卵巢癌skov3细胞）、5、15、30mg/l各组信号强度相比，差异均有统计学意义（p均<0.001）。结论：当spioshrna分子探针铁浓度为45mg/l时，可有效转染并特异性抑制卵巢癌skov3细胞的表达，能被mri所检测，初步证实具有诊断与治疗的双重作用。