根癌农杆菌介导的尿嘧啶缺陷烟曲霉转化是基因敲除的有效方法

？目的:探讨用嘧啶营养缺陷作为筛选标记、根癌农杆菌介导的转化方法敲除烟曲霉基因.方法:以pyrg作为筛选标记,在双元载体pdht/sk上分别构建烟曲霉fapi,和shoi基因的打靶序列.构建好的质粒分别转化入根癌农杆菌.24℃条件下,含打靶质粒的根癌农杆菌与烟曲霉在不含尿嘧啶和尿苷的诱导培养基上共培养48h;然后将培养物转移到37℃,筛选转化子.结果:根癌农杆菌介导的烟曲霉转化同源重组率较高,fapi基因为44%(7/16)、shoi基因为35%(7/20).结论:以pyrg作为筛选标记、根癌农杆菌介导的转化方法能高效敲除烟曲霉基因,为烟曲霉基因功能研究提供了有效方法.