鼠抗人cmtm7单克隆抗体的制备和鉴定

？目的:制备鼠抗人cmtm7(cklf-likemarveltransmembranedomaincontaining7)蛋白的单克隆抗体,探讨cmtm7蛋白的分子结构和生物学功能.方法:通过生物信息学对cmtm7的蛋白序列进行分析,选取了3段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素(keyholelimpethemocyanin,klh)偶联,混合后免疫balb/c小鼠.取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞sp2/0进行常规融合,间接elisa方法进行筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗cmtm7蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用westernblot、免疫荧光以及免疫细胞化学等方法对其特性进行鉴定.结果:成功地建立了2株稳定分泌抗cmtm7蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为mc9和2c9,其免疫球蛋白亚类均为igg1.mc9单抗识别的抗原表位位于cmtm7氨基酸残基163～175区域(cmtm7163-175),可用于westernblot、免疫荧光和免疫细胞化学分析(immunocytochemistry,icc).2c9单抗识别的抗原表位位于cmtm7氨基酸残基19～44区域(cmtm719-44),该单抗只能用于westernblot分析.初步的功能研究提示,cmtm7蛋白在植物血凝素(phytohemagglutinin,pha)活化早期的外周血淋巴细胞中表达上调.结论:获得了特异性好、能够识别不同抗原表位以及不同用途的鼠抗人cmtm7蛋白的单克隆抗体,为研究cmtm7蛋白的分子结构以及功能特性奠定了基础.