hbx诱导p16ink4a高甲基化在chang细胞株恶性转化倾向中的作用

？目的：探讨乙型肝炎病毒x（hbx）蛋白对p16ink4a表达和甲基化的影响，以及其在肝细胞癌早期发生中的作用机制。方法：采用脂质体法将真核表达载体pcdna3.1b-hbx和pcdna3.1b质粒分别稳定转染chang细胞，构建表达hbx的细胞株chang-hbx和不表达hbx的细胞株chang-vector；半定量rt-pcr和westernblot法分别在mrna和蛋白质水平上检测chang-hbx、chang-vector和chang细胞株中的p16ink4a表达；甲基化特异性pcr检测hbx对细胞中p16ink4a启动子甲基化的影响；cck-8溶剂检测3种细胞株的增殖曲线，流式细胞仪观察3种细胞的细胞周期和细胞凋亡率，重复3次。结果：成功构建了chang-hbx和chang-vector稳定细胞株，chang-hbx细胞生长速度增快，chang-hbx细胞的s期平均比率明显高于chang-vector细胞和chang细胞(28.96%vs.21.53%,p<0.001;28.96%vs.21.5%,p<0.001)，而且chang-hbx细胞的细胞凋亡率平均值明显低于chang-vector细胞和chang细胞(2.71%vs.3.69%,p<0.001;2.71%vs.3.36%,p<0.001)。初步机制研究证实hbx蛋白介导肝细胞的p16ink4a高甲基化，进而导致p16ink4a在mrna和蛋白水平上表达均下降。结论：hbx通过诱导p16ink4a高甲基化下调后者的表达水平，可能在chang细胞的恶性转化倾向中发挥作用。