激活notch信号通路可延迟人牙髓细胞的老化表现

？目的：建立notch信号通路激活的人牙髓细胞模型，探讨激活notch信号通路对人牙髓细胞老化的影响。方法：体外培养人牙髓细胞，从第4代开始实验，将牙髓细胞分为激活组和阴性对照组。激活组采用10mg/l的jagged1蛋白包被培养皿的方法激活notch信号通路，阴性对照组的培养皿不做处理。以实时定量pcr（real-timequantitativepcr，rt-qpcr）检测第4代、第8代、第10代notch信号通路下游基因hes1的表达水平。分三个水平观察notch信号通路激活后人牙髓细胞的变化：（1）细胞水平，用倒置显微镜观察细胞形态的变化，用mtt法检测细胞活力改变；（2）代谢酶水平，用碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,alp）染色及活性测定试剂盒检测alp的表达和活性，用衰老相关β-半乳糖苷酶染色方法检测阳性细胞百分率；（3）基因水平，用rt-qpcr检测老化相关基因p53和p16的表达。t检验比较激活组和阴性对照组各指标的差异。结果：采用jagged1蛋白包被培养皿后，notch信号通路下游基因hes1表达增高，表明建立了notch信号通路激活的人牙髓细胞模型。激活组牙髓细胞与阴性对照组牙髓细胞相比，较晚出现形态显现衰老的细胞，第8代、第10代细胞活力升高，alp表达量升高；第10代alp活性升高，β-半乳糖苷酶表达下降；各代p16基因表达水平均降低，第8代、第10代p53基因表达水平降低。结论：jagged1蛋白可有效激活notch信号通路，激活notch信号通路后，人牙髓细胞在细胞水平、代谢酶水平、基因水平均表现出老化延迟的趋势。