人胚胎干细胞分化为角质形成细胞过程中标志物的表达特点

？目的：诱导人胚胎干细胞（humanembryonicstemcells，hescs）定向分化为角质形成细胞k-hescs（keratinocytederivedfromhumanembryonicstemcells），并分析诱导过程中k-hescs不同标志物的表达特点。方法：运用含骨形成蛋白4、维甲酸和n2添加剂的上皮分化培养基直接诱导hescs分化为k-hescs，通过染色体核型分析检测k-hescs核型，通过实时定量pcr检测k-hescs在分化的不同时期基因的表达及其与原代人牙龈上皮细胞（humangingivalepithelialcells，hgecs）、人永生化口腔上皮细胞（humanimmortalizedoralepithelialcells，hioecs）、人永生化皮肤角质形成细胞hacat的基因表达差异；利用免疫组织化学检测不同标志物在k-hescs的蛋白表达。结果：运用上皮分化培养基成功地诱导hescs分化为上皮样细胞k-hescs；k-hescs核型具有正常46条染色体，无结构异常；k-hescs中角质形成细胞标志物基因p63的表达明显低于hacat细胞（p<0.05），而与hgecs和hioecs中的表达差异无统计学意义（p>0.05）。结论：运用上皮分化培养基可成功诱导hescs分化为具有正常核型的k-hescs；标志物的表达特点提示诱导hescs分化为k-hescs的过程是从hescs向单层上皮干细胞分化继而转向复层上皮终末分化发展的趋势，最终得到的k-hescs类似于单层鳞状上皮干细胞向终末分化初始阶段的角质形成细胞，该阶段的细胞由上皮干细胞静止状态被激活，处于分化初始高增殖活力阶段。