骨形成蛋白-7对多孔钽/软骨细胞复合物分泌功能以及col-ⅱ、agg和sox9基因表达的影响

？目的：研究人重组骨形成蛋白-7（bonemorphogeneticprotein-7，bmp-7）对国产多孔钽/软骨细胞复合物中软骨细胞分泌功能以及ⅱ型胶原（typeⅱcollagen，col-ⅱ）、蛋白聚糖（aggrecan，agg）和sry相关高迁移率组基因9（sry-relatedhighmobilitygroup-boxgene9，sox9）mrna表达的影响。方法：3周龄新西兰幼兔，取双膝关节软骨细胞分离培养及鉴定，将生长状态良好的第2代细胞以1×106/ml浓度接种于多孔钽并给予不同浓度bmp-7，分为对照组（多孔钽/软骨细胞组）、50μg/lbmp-7/多孔钽/软骨细胞组、100μg/lbmp-7/多孔钽/软骨细胞组及200μg/lbmp-7/多孔钽/软骨细胞组。cck-8法检测不同浓度bmp-7对多孔钽/软骨细胞生长及增殖的影响，扫描电镜观察各组软骨细胞在多孔钽表面及内部生长情况，二甲基亚甲蓝（dimethylmethyleneblue，dmmb）比色定量法对bmp-7/多孔钽/软骨细胞复合物糖胺多糖（glycosaminoglycan，gag）进行定量检测，实时荧光定量pcr检测col-ⅱ、agg和sox9mrna的表达。结果：原代软骨细胞培养24h后呈梭形生长，4d后细胞呈多角形，胞浆丰富。阿辛蓝（alcianblue）、番红o（safranino）、col-ⅱ免疫细胞化学染色均呈阳性反应。cck-8法细胞增殖检测结果显示，100μg/lbmp-7/多孔钽/软骨细胞组细胞增殖水平高于其他各组（p<0.05）。扫描电镜示各组软骨细胞在多孔钽表面生长状态良好，细胞有多个突起、伸展、叠层生长并覆盖于多孔钽表面。gag定量检测显示，100μg/lbmp-7/多孔钽/软骨细胞组gag含量比其他各组均明显升高（p<0.05）；实时荧光定量pcr检测显示，各实验组col-ⅱ、agg和sox9mrna表达量均高于对照组，以200μg/lbmp-7/多孔钽/软骨细胞组升高最为明显（p<0.05）。结论：bmp-7/多孔钽/软骨细胞复合体能促进体外软骨细胞增殖及细胞外基质的分泌，促进软骨基因的表达。