流式细胞术检测体外微核方法的建立

？目的：建立96孔板流式细胞术体外微核自动化检测的方法，并探讨其用于药物早期遗传毒性筛选和遗传毒性评价的可能性。方法：试验分为+s9短时处理组(4h)和-s9持续处理组(24h)，分别选择3个不同浓度的环磷酰胺和丝裂霉素c处理cho-k1细胞，24h后收获细胞。采用ema和sytoxgreen双色标记，流式细胞仪分析96孔板的微核率，并与常规标准平皿培养、细胞分裂阻滞法的双核微核结果进行比较。结果：在有或无s9处理条件下，不同浓度的环磷酰胺、丝裂霉素c诱导产生的微核率较溶剂对照组均显著增加(p均<0.05)，剂量-效应关系明显。两种微核检测方法的spearman相关系数(rs)为1.000。结论：流式细胞术检测环磷酰胺、丝裂霉素c作用于cho-k1细胞的微核试验结果均为阳性，与文献报道一致，因而本试验初步建立了流式细胞术体外微核检测方法。流式细胞术检测微核的方法与人工阅片的方法相关性好，提示该方法用于化合物早期遗传毒性筛选和遗传毒性评价具有良好的前景。