定点诱变法构建p53基因多态质粒

？目的：为了研究p53codon72多态的功能，采用定点诱变法构建人p53基因的多态质粒。方法：设计带有突变碱基的引物，通过pcr扩增引入突变碱基，再将突变后的p53序列插入载体中，经测序确定所扩增的dna序列，并用体外转录翻译系统制备p53蛋白和iaspp蛋白，免疫沉淀法检测蛋白相互作用。结果：通过pcr获得的含突变碱基的p53序列经连接后插入真核表达载体preceiver-m01中，构建了p53多态位点为72arg的表达质粒preceiver-m01-p53(arg72)。测序证明序列正确，表达的p53蛋白能与iaspp相互作用，具有生物学功能。结论：成功构建了p53多态(72arg)真核表达载体，为进一步深入研究p53多态的生物学功能奠定了基础。