hiv-1gag基因经卵母细胞垂直传递模型的建立

？目的：建立hiv-1gag基因经卵母细胞垂直传递的模型，为hiv通过雌性生殖细胞垂直传递的研究奠定实验基础。方法：将含有hiv-1gag基因的重组质粒pires2-egfp-gag注射到小鼠双侧卵巢，转染生殖细胞。应用超排获得实验用卵母细胞，收集显示绿色荧光的卵母细胞，将一部分呈现绿色荧光的卵母细胞裂解，提取基因组dna，采用pcr检测gagdna是否存在卵母细胞中；再将另一部分带有绿色荧光的卵母细胞常规制备中期染色体片，用荧光原位杂交(fish)技术检测hiv-1gag基因在成熟卵母细胞染色体上的整合。结果：转染pires2-egfp-gag后，在荧光显微镜下能够很清楚地看到带有绿色荧光的卵母细胞；pcr结果显示在带有绿色荧光的卵母细胞中可检测到hiv-1gag基因特异的阳性条带；fish检测结果显示在卵母细胞的中期染色体上检测到hiv-1gagdna的阳性信号。结论：hiv-1gag基因能够通过卵透明带和细胞膜并整合到卵母细胞基因组内，本研究为hiv-1gag基因可经过雌性生殖细胞垂直传递给子代奠定了实验基础。