cyp2e1基因过表达细胞株的建立及鉴定

？目的：应用分子克隆技术，构建cyp2e1基因过表达载体，转染l02肝细胞，建立cyp2e1过表达细胞株并进行鉴定，为深入研究环境和职业毒物的毒作用机制提供模型细胞。方法：根据genbank提供的cyp2e1基因cdna序列设计引物，pcr扩增该基因并将其克隆到慢病毒过表达载体plvx-acgfp1-c1中，将已经构建的慢病毒载体对293ft细胞进行转染，收集病毒上清，感染正常l02肝细胞。用嘌呤霉素进行筛选得到转染cyp2e1基因的l02细胞，通过基因测序、荧光定量pcr和westernblot对细胞株进行鉴定。结果：测序证明重组慢病毒过表达载体cyp2e1基因序列与genbank提供的cyp2e1序列一致，荧光定量pcr检测转染cyp2e1基因的l02细胞比正常肝细胞cyp2e1mrna表达提高273倍，westernblot实验显示转染cyp2e1基因的l02细胞cyp2e1蛋白表达水平比正常肝细胞提高3.2倍。结论：成功构建了cyp2e1基因过表达细胞株，可应用于环境毒物和职业毒物的分子机制研究。