酸性神经磷脂酶在维生素e琥珀酸酯诱导胃癌细胞凋亡过程中对内质网应激的影响

？？目的：探讨酸性神经磷脂酶(acidsphingomyelinase，asmase)在维生素e琥珀酸酯(vitaminesuccinate，ves)诱导胃癌细胞凋亡过程中对内质网应激的影响。方法：常规体外培养人低分化胃癌sgc-7901细胞，将细胞分为asmase抑制剂地昔帕明(desipramine，des)处理组(12.5μmol/ldes作用2h)，对照组(含2％胎牛血清的rpmi-1640培养液)，ves+des组(用12.5μmol/ldes抑制asmase活性2h后加20μg/mlves)以及ves处理组(20μg/ml)。以asmase活性试剂盒检测0、1.5、3、6h时ves+des组及ves处理组细胞中asmase活性。mtt法分别检测12、24和48h时各组细胞的增殖情况。再在处理细胞24h后，采用倒置显微镜观察各组细胞形态；流式细胞仪检测细胞凋亡率；westernblot法检测细胞中内质网应激相关蛋白grp78、grp94、perk、p-perk、chop和caspase-4的表达。结果：ves(20μg/ml)处理能够诱导细胞中asmase活性增加，在3h时细胞中asmase活性达到最高，随后逐渐降低；ves+des组细胞中asmase活性始终维持在较低的水平。与对照组相比，des组在各项检测中均无明显变化，而ves组与ves+des组在处理细胞12、24与48h后，细胞的增殖受到明显抑制(p均<0.05)，并呈时间-效应趋势，且ves+des组细胞不同时间点的相对增殖率均明显高于ves组(p均<0.05)；细胞形态学显示20μg/mlves处理细胞后，镜下死细胞明显增多，而ves+des组死亡细胞数量较ves组减少；流式细胞术检测凋亡率显示ves处理组为39.21%±1.90%，明显高于空白对照组(3.91%±1.68%)与des组(4.07%±1.39%)(p均<0.05)，ves+des组(19.47%±4.46%)较ves组明显降低(p<0.05)；westernblot结果显示ves+des组细胞中内质网应激相关蛋白grp78、grp94、p-perk、chop以及c-caspase-4表达水平较单纯ves处理组降低(p均<0.05)。结论：asmase参与ves通过内质网应激诱导人胃癌sgc-7901细胞凋亡的过程，起促进凋亡的作用。