一种人神经母细胞瘤辅酶ii-依赖性视黄醇脱氢酶cdna的克隆及特征分析

？背景与目的:检测神经母细胞瘤中新的辅酶ii-依赖性视黄醇脱氢/还原酶[nadp(h)-dependentretinoldehydrogenase/reductase，nrdr]选择性剪接亚型。材料与方法:我们用nrdr特异引物，从人神经母细胞瘤细胞系sk-n-sh和sk-sy-5ycdna中分别经pcr扩增出635bp和429bpdna片段，测序证实635bp片段是nrdr,而429bp片段是选择性剪接新亚型。再用快速cdna末端扩增(rapidamplificationofcdnaends,race)方法得到429bp片段cdna全长序列。用绿色荧光蛋白与新亚型的融合蛋白做亚细胞定位。结果:得到新亚型全长并命名为humannrdra2(humnrdra2)(ay616182)。已知nrdr有8个外显子，而新亚型humnrdra2由选择性剪接造成了第4和第6外显子丢失，从第5外显子开始读码框架前移1bp，导致随后的编码区框码漂移(frameshift)，同时蛋白翻译终止信号提前出现，产生仅有188个氨基酸的蛋白，其中第137氨基酸以后的序列相对于nrdr完全发生改变，同时c-末端的过氧化物酶体定位信号-srl丢失，却在160～176氨基酸处出现了一个细胞核定位信号。我们在ests库中未找到与其相同的剪接形式，提示它可能是神经母细胞瘤特有的一种nrdr剪接亚型。用gfp-nrdra2融合蛋白做该蛋白的亚细胞定位，发现发绿色荧光的细胞均已悬浮，但悬浮状态不佳，而作为对照的nrdr另一亚型则能定位成功，提示nrdra2蛋白可能具有一定的细胞毒性。结论:人神经母细胞瘤nrdra2选择性剪接亚型羧基端框移突变并有核定位序列；该蛋白可能是一种细胞毒性蛋白。