宫颈癌细胞中nrdr选择性剪接新亚型表达质粒的构建及原核表达

？背景与目的：构建宫颈癌细胞中视黄醇脱氢/还原酶_辅酶ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(nrdr)及其选择性剪接亚型nrdrb1原核表达载体，并在bl21_ai大肠杆菌中表达融合蛋白。材料与方法：用rt_pcr检测宫颈癌组织中nrdr、nrdrb1表达，race方法克隆nrdrb1全长cdna，运用gateway表达系统将nrdr、nrdrb1编码区序列构建到表达载体，转化到大肠杆菌中表达，表达的融合蛋白通过金属离子亲和层析纯化。结果：在宫颈鳞癌组织中发现nrdr新的选择性剪接亚型nrdrb1，构建了nrdr、nrdrb1原核表达载体，在bl21_ai中表达出氨基端含6×his标签的重组蛋白，诱导表达4h后目的蛋白可占总蛋白量的30％～50％，经一步亲和层析得到了高纯度的nrdr及nrdrb1重组蛋白。结论：在大肠杆菌中获得高效表达的nrdr、nrdrb1蛋白，为进一步研究其功能提供了实验材料。