apobec-3f和apobec-3g与乙肝核心抗原的相互作用研究

？目的:人载脂蛋白bmrna编辑酶催化多肽apobec-3f(a3f)和apobec-3g(a3g)可抑制hbv复制,并参与hbv基因组的超突变,其中hbcag被认为是潜在作用位点,为此本文研究a3f和a3g与hbcag可能存在的蛋白相互作用方式。方法:rt-pcr克隆人a3f和a3g的cdna,并构建相应酵母双杂交表达载体pgadt7-a3f/-a3g;pcr克隆hbvayw亚型hbcag基因,构建其酵母双杂交表达载体pgbkt7-hbcag。pgbkt7-hbcag分别与pgadt7-3g和pgadt7-3f共转化ah109酵母菌,利用营养二缺平板及四缺平板培养及α-半乳糖苷酶活性测试,检测hbcag与a3f和a3g的直接作用情况。构建含有hbcag、人a3f和a3g基因的多种标签融合真核表达质粒,脂质体法转染hela细胞后进行免疫共沉淀实验(co-ip),并通过westernblot检测免疫共沉淀产物确定hbcag与a3f和a3g之间是否存在间接相互作用。结果:酶切及dna测序分析表明成功克隆hbcag、人a3f和a3g,并成功构建酵母双杂交、真核表达及亚细胞定位相关的表达质粒。通过酵母双杂交实验对α-半乳糖苷酶定性和定量检测显示,a3f和a3g与hbcag无显著的直接相互作用。westernblot及co-ip实验结果表明a3f和a3g与hbcag均存在相互作用。结论:a3f和a3g蛋白与hbcag蛋白之间确实存在相互作用,推测这种作用不是通过两个蛋白直接结合实现的。