多色荧光原位杂交方法同时检测人精子染色体数目畸变和结构畸变

？背景与目的：建立可以同时检测人精子染色体数目畸变和结构畸变的多色荧光原位杂交技术。材料与方法：使用2条1号染色体探针(着丝粒和末端探针)，2条18号染色体着丝粒探针，分别用地高辛或生物素标记，与人精子核dna进行荧光原位杂交，用cy3－链亲和素检测生物素探针杂交信号；用与fitc结合的抗地高辛抗体检测地高辛信号，结果：在nikon荧光显微镜下，可以清楚看到精子头部呈现兰色的荧光信号背景下，有红色荧光点信号(1号染色体着丝粒)，绿色荧光信号(1号染色体末端)，和黄色荧光信号(18号染色体着丝粒部位红、绿两种荧光信号的混合色)。本方法能够同时检测到精子1号，18号染色体非整倍体率(双体率，缺体率)，1号染色体短臂和着丝粒结构畸变(重复率，缺失率)，以及二倍体精子率3种染色体异常。用建立的方法检测14名正常人135937条精子，测得1号染色体双体率、缺体率分别为0.045％和0.048％；18号染色双体率、缺体率分别为0.053％和0.045％;二倍体精子率为0.061％；1号染色体末端重复率、缺失率分别为0.082％、0.069％，1号着丝粒重复率、缺失率分别为0.075％，0.060％；均在文献报道范围内。结论：本研究建立的多色fish可用于测定正常人和环境化学物接触人群精子染色体数目畸变和结构畸变。