大鼠卵巢颗粒细胞的原代培养与鉴定

？背景与目的：探讨大鼠卵巢高纯度颗粒细胞培养及鉴定的方法，建立一种简便、稳定的细胞模型。材料与方法：选用sd雌性大鼠(21～25d)，皮下注射孕马血清促性腺激素(pmsg)，48h后用颈椎脱臼法处死，剖取双侧卵巢，采用机械分离方法释放卵巢颗粒细胞，0.25％胰蛋白酶消化结合低速离心分离细胞，用含15％胎牛血清的dmem/f12培养基，置于37℃，5％co2培养箱培养。以he染色和卵泡刺激素受体(fshr)免疫组化染色对所培养的卵巢颗粒细胞进行鉴定，用mtt法绘制细胞生长曲线，并检测细胞培养液雌二醇(e2)和孕酮(p)的分泌量。结果：分离培养的卵巢颗粒细胞存活率>90％，细胞纯度达到95％以上；体外培养的颗粒细胞对数生长期为48～96h；颗粒细胞具有正常的分泌雌激素功能，在培养24h细胞培养液中e2和p的分泌量分别为(10.36±15.89)pg/ml和(77.91±17.24)pg/ml。结论：采用机械分离法结合胰蛋白酶消化及低速离心法分离培养的卵巢颗粒细胞纯度高、活性好，用fshr表达染色鉴定颗粒细胞是一种简便快速的方法。