基于三色流式细胞术的小鼠外周血微核试验方法的建立

？为克服传统显微镜检微核(micronucleus，mn)方法耗时、费力、主观等缺点，建立基于cd71、cd61荧光抗体和碘化丙啶(cyclophosphamidr，pi)的三色流式细胞术(flowcytometry，fcm)研究小鼠外周血微核的自动化检测方法。方法:经口单次给予小鼠0、20、40和80mg/kg环磷酰胺(cp)，于不同时间点收集外周血；另一批小鼠给予cp40mg/(kg·d)经口灌胃，连续染毒5d，分别于给药前和每次给药后24h收集外周血。采用-80℃甲醇固定血细胞，cd71、cd61荧光抗体、rna酶和pi孵育血细胞，以疟原虫感染的红细胞作为生物标准物调校fcm后，对cp诱导的小鼠外周血中含mn的cd71+网织红细胞(reticulocytes，ret)进行检测。结果:单次染毒后48hmn-ret达峰值，且mn-ret呈现明显的剂量依赖性增加(r=0.9849,p<0.01)；重复染毒5d，fcm监测的mn-ret染毒2d后达到稳态水平。fcm检测的mn-ret峰值和稳态水平与常规显微镜观察的骨髓微核率有良好的相关性(r=0.9212,p<0.01)。结论:fcm小鼠外周血微核法稳定可靠，可以作为常规显微镜小鼠骨髓阅片法的替代方法，用于小鼠体内微核试验。