苦瓜map30基因功能性片段的克隆和表达

？背景与目的：map30是一种具有抗肿瘤、抗hiv和抗病毒等功能的蛋白。通过克隆和表达该蛋白的核心片段，用于进一步研究基因功能和结构域之间的关系。材料与方法：设计了两对特异性的引物，通过pcr技术从苦瓜总dna中分别扩增出两段含有成熟map30蛋白基因的功能性片段t8_s194和t8_n263，然后将目标基因克隆到原核表达载体pet_28a上，构建成带有c端6his_tag的融合表达载体，经测序鉴定后用cacl2介导的化学转化法转化到e.colirosettatm(de3)plyss中。利用pcr筛选出阳性克隆，经iptg诱导工程菌表达出重组蛋白。通过westernblot对重组蛋白进行分析。结果：含t8_s194和t8_n286基因片段的两个表达载体构建成功，它们的表达重组蛋白能与兔抗his_tag多克隆抗体发生特异性反应。结论：构建的两个含目的基因的表达载体均能在e.colirosettatm(de3)plyss中表达出预期的重组蛋白，为进一步研究这两个重组蛋白打下了基础。