人支气管上皮hsa-mir-148a-3p低表达细胞株的建立

？目的：建立稳定的hsa-mir-148a-3p低表达人支气管上皮细胞株(16hbe)。方法：根据mirbase中提供的序列信息设计hsa-mir-148a-3ptoughdecoyrna(tudrna)，并将其连接到慢病毒载体plko.1-puro上。将重组慢病毒载体转染至293ft细胞并包装为慢病毒后，收集病毒上清，感染正常16hbe细胞。用嘌呤霉素筛选出has-mir-148a-3p低表达的16hbe细胞株，通过荧光定量pcr对其进行鉴定，然后对筛选出的细胞分别采用荧光定量pcr和westernblot检测dna甲基转移酶1(dnmt1)mrna和蛋白的表达水平。结果：测序结果表明含hsa-mir-148a-3ptudrna的重组慢病毒载体构建成功；荧光定量pcr检测显示has-mir-148a-3p低表达的16hbe细胞株has-mir-148a-3p的表达量比正常16hbe细胞低44%(p<0.01)，其作用靶基因dnmt1的mrna和蛋白表达水平分别为正常细胞的3.4倍和2.0倍(p均<0.01)。结论：成功建立hsa-mir-148a-3p低表达的16hbe细胞，hsa-mir-148a-3p的低表达能提高dnmt1mrna和蛋白的表达水平。