mts1基因β启动子e2f1结合位点序列突变重组质粒的构建与表达

？目的：深入研究mts1基因β启动子的转录激活与e2f1转录因子的相互作用关系，阐明该基因转录水平的调控机制。方法：用pcr定点突变方法或酶切连接法，构建β启动子0.38kbsacⅱ-sacⅰ酶切片段中e2f1a、b、c任意2个位点或3个位点均突变的pgl3重组质粒。用脂质体介导的基因瞬时转染法，将构建的重组质粒转染mts1基因双等位缺失的急性t淋巴细胞白血病jurkat细胞，检测pgl3重组质粒中荧光素酶报告基因的表达。结果：构建的e2f1a、b、c结合位点突变的重组质粒经sacⅰ或naeⅰ酶切鉴定和dna序列分析得到证实。与e2f1位点野生型重组质粒比较，突变型重组质粒在jurkat细胞中荧光素酶报告基因的表达量减少，以3个位点均突变的重组质粒为明显。结论：构建的e2f1a、b、c2个或3个结合位点均突变重组质粒成功，可通过基因转染用于研究mts1基因的功能试验中；mts1基因β启动子的转录活性可能与e2f1转录因子的反式激活有关。