狭边大叶藓(rhodobryumontariense)issr-pcr反应体系的建立与优化

？研究目的是获得适用于狭边大叶藓(rhodobryumontariense)遗传多样性研究的issr-pcr反应标准化程序。通过单因素试验设计,对mg2+、dntps、taqdna聚合酶、模板、引物浓度,以及退火温度、循环次数等影响issr扩增的主要因素进行了研究和优化。结果表明,ubc808、ubc811、ubc812、ubc825、ubc826、ubc841、ubc888及ubc891引物适用于该研究;20μlissr-pcr最适反应体系包括:6ngdna模板、0.4μmol/l引物、2.25mmol/lmg2+、0.6utaqdna聚合酶、0.4mmol/ldntps。扩增程序为:94℃预变性4min;然后94℃变性1min,48~50℃(根据不同引物确定)复性2min,72℃延伸1min,共进行40个循环;最后,72℃延伸7min,4℃保存。