短命植物东方旱麦草rubisco大亚基基因(rbcl)的克隆及表达分析

？利用pcr、dna重组、原核与真核生物表达等技术从新疆短命植物东方旱麦草(eremopyrumorientale)基因组中扩增出rubisco大亚基基因rbcl(genbank登录号为fj346562),并构建了原核与真核表达载体pgex4t-1-rbcl和pcdna3-rbcl,随后分别在原核宿主bl21(de3)和小鼠中进行了表达,并利用真核表达载体和纯化蛋白制备的抗体,对表达产物的特异性进行了western印迹检测。结果表明:东方旱麦草的rbcl基因可读区包含1431bp,与旱麦草rbcl基因的同源性达99.86%,推测编码476个氨基酸,分子量56kd。该基因在bl21中以融合蛋白gst-rbcl形式表达并存在于包含体中,融合蛋白大小约为82kd。rt-pcr检测到该基因在小鼠肝脏中的表达。利用真核表达载体与纯化融合蛋白进行联合免疫制备的rbcl抗体可与rbcl特异性地结合,这为短命植物东方旱麦草基因后续的免疫定位检测奠定了基础。