红肉猕猴桃dfr基因的克隆及表达分析

？利用葡萄(vitisvinifera)果实的dfr-cdna序列搜索猕猴桃(actinidialindl.)est数据库,拼接所有与该cdna相似片段成contig并借此设计引物,分离出红肉猕猴桃(a.chinensisvar.rufopulpa)中dfr的两个克隆(acdfr1和acdfr2)的片段。在此基础上利用5′race和3′race技术,分别克隆到具有完整阅读框的acdfr1(1264bp)和靠近3′端的部分acdfr2序列(880bp)。acdfr1与茶dfr-cdna(camelliasinensis)相似达84%,且acdfr1与非洲菊变种(gerberahybridavar.regina)的氨基酸序列相似达80%。据dfr聚类分析,acdfr1与acdfr2蛋白类型上差异显著。实时定量pcr分析表明,acdfr1在‘金魁’(a.chinensisvar.deliciosa‘jinkui’)中表达很高,acdfr1和acdfr2在‘金农’(a.chinensisvar.chinensis‘jinnong’)与‘红阳’(a.chinensisvar.chinensis‘hongyang’)中较低,且在果实发育后期(大约花后90～120d)均有所升高,二者可能参与了红肉猕猴桃中花青素的积累,而在绿肉猕猴桃‘金魁’与黄肉猕猴桃‘金农’中,acdfr1可能还参与了类黄酮代谢过程中的上游分支途径。