粗山羊草(aegilopstauschii)中pinb基因的克隆和表达分析

？puroindolinea(pina)和puroindolineb(pinb)是控制小麦籽粒硬度的主效基因。根据已报道的小麦pinb基因的保守序列,设计合成了一对特异性引物,对粗山羊草aegilopstauschii(dd)的基因组dna进行pinb基因扩增、克隆和序列分析,发现了一个新型pinb等位基因。该基因长447bp,编码148个氨基酸残基,具有麦类作物pinb蛋白所特有的wptkwwk色氨酸结构域和10个半胱氨酸所形成的5个二硫键结构。与软粒小麦cv.capitole的pinb-d1a相比较,该基因含有14个氨基酸变异位点,其中包括一个紧邻色氨酸结构域的变异位点(val66phe),其核苷酸和氨基酸同源性分别为93.3%和90.5%。rt-pcr和westernblot证实了pinb基因在籽粒胚乳中的表达。southernblot分析结果表明,粗山羊草中pinb基因为单拷贝。研究结果表明,粗山羊草中包含着与小麦差异较大的籽粒硬度控制基因,对此基因的进一步研究将加深对小麦籽粒硬度形成分子机制的了解。