番茄(solanumlycopersicum)果胶酸裂解酶p56在大肠杆菌中的重组表达

？果胶酸裂解酶p56在番茄花粉管伸长过程中起着重要的作用,为了制备番茄p56蛋白的抗体,进行番茄花粉管萌发过程中p56蛋白的免疫组织化学研究,对p56基因在大肠杆菌系统的重组表达进行了研究。先采用overlap-pcr的方法,从番茄基因组dna中克隆了成熟p56蛋白的cdna序列(lat56),再构建重组表达质粒pet28a(+)-lat56,转化大肠杆菌bl21-codenplus(de3)-ril,得到了重组表达工程菌pet-28a(+)-lat56-bl21-co-denplus(de3)-ril。在0.5mmol/liptg、15℃和180r/min条件下,经过60h的诱导培养,重组蛋白表达量为细胞总蛋白的30%左右,主要以包涵体形式存在,重组蛋白经ni2+-nitrilotriacetate-agrose亲和柱层析,得到了sds-page显示为单一蛋白带的纯化蛋白。