纳豆激酶原核表达载体的构建及其活性鉴定

摘要利用引物搭桥的方法，经pcr扩增，获得了纳豆激酶成熟肽基因(nk)，从而构建了大肠杆菌表达质粒nk/ptwin1，nk/pet32a及nk/pml？c2x，经分别转化宿主菌er2566，bl21和er2566，获得了转纳豆激酶基因重组菌．结果表明，nk/ptwin1？er2566和nk/pet32a？bl21的纳豆激酶蛋白表达量较高．本研究选用nk/ptwin1？er2566作为表达菌株，对其进行发酵表达．sds-page显示，目的蛋白约占菌体总蛋白的36%，该蛋白是以包涵体形式存在的．包涵体经收集、蛋白变性及复性，并经过spsepharose分离纯化，得到了纯化的纳豆激酶蛋白，琼脂糖-纤维蛋白平板法测出1mg纳豆激酶干粉的溶栓活性相当于600u尿激酶．本文从基因工程角度研究纳豆激酶基因的克隆、表达及纯化，为利用基因工程菌生产纳豆激酶奠定了基础．图5表1参11