产1,3-丙二醇温控重组大肠杆菌jm109(pbv220-yqhd-dhab)的构建

摘要1,3？丙二醇(1,3？pd)是一种重要的化工原料，其最重要的用途是作为合成聚酯ptt的单体.由于微生物发酵法生产1,3？pd具有操作简单，不易产生有毒副产物等特点，已得到广泛关注.本研究在前期工作的基础上，分别获得了来源于肺炎克雷伯氏菌的甘油脱水酶编码基因dhab和来源于大肠杆菌的1,3？pd氧化还原酶同工酶编码基因yqhd，利用温控表达载体pbv220串联构建了重组质粒pbv220？yqhd？dhab，将其转化大肠杆菌得到产1,3？丙二醇温控重组大肠杆菌jm109(pbv220？yqhd？dhab).该重组菌在lb培养基中,30℃好氧培养12h至对数生长中期，再经42℃好氧诱导发酵4h，测得胞内甘油脱水酶和1,3？丙二醇氧化还原酶同工酶的酶活力分别达到260u/mg蛋白和140u/mg蛋白；在含甘油40g/l的发酵培养基中,30℃好氧培养12h至对数生长中期，再经42℃好氧诱导发酵4h，测得发酵液中1,3？pd含量为8？5g/l.这将为进一步构建基因工程菌生产1,3？pd打下坚实的基础.图6表1参18