极端嗜热菌海栖热袍菌木聚糖酶b的克隆和表达

摘要极端嗜热菌海栖热袍菌msb8（thermotogamaritimamsb8）能够利用木聚糖代谢，并具有两个产木聚糖酶的基因.本研究首次克隆和在大肠杆菌中表达海栖热袍菌msb8的第2个木聚糖酶基因即xynb基因.以基因组dna为模板，根据xynb基因的全序列设计了两对引物，在合适的pcr反应条件下有效地扩增出了xynb基因片段.选用pet28a（+）表达载体，ncoi-hindⅲ酶切位点并编码了羧基端6×his标签的阳性克隆表达成可溶且具有生物活性的蛋白质.xynb结构基因由1044对碱基组成，编码347个氨基酸.根据已知木聚糖酶蛋白质氨基酸的同源性分析，xynb与t.sp.strainfjss3-b.1的xyna的同源性最大，为85%，与t.neapolitana的xynb同源性次之，为82%，与其它木聚糖酶的同源性小于43%.另外，xynb属于f/10族木聚糖酶，且含有单一功能区.表3图3参12