嗜水气单胞菌fnr的表达、纯化及酶活分析

铁氧还蛋白还原酶（ferredoxin-nadp+reductases，fnr）是一种在生物体的多种代谢中起着重要作用的黄素酶.为探讨嗜水气单胞菌（aeromonashydrophila）xs91-4-1中fnr的功能和结构，通过克隆其fnr基因，构建重组表达载体pet42a-fnr，表达并分离纯化了具有活性的gst-fnr融合蛋白，根据米曼氏动力学测定了纯化蛋白对nadph及edta-fe3+的酶活力，采用生物信息学方法对xs91-4-1fnr蛋白序列进行系统学分析，并初步预测了该蛋白三维结构.结果表明：重组质粒能够在宿主菌大肠杆菌（escherichiacoli）bl21中获得高效可溶性表达，经镍柱亲和层析法可纯化出电泳均一的目的蛋白，蛋白浓度为67.3μg/ml；纯化蛋白对nadph的比活力为1.78u/mg，对edta-fe3+的比活力为1.13u/mg，比活力比粗酶分别提高了约29和22倍；生物信息学分析表明xs91-4-1fnr分布在bacterial-classfnr分支上且具有与此类fnr相似的结构特点.上述结果显示嗜水气单胞菌fnr具有与已报道的fnr相似的基本特性，并推测其可能属于bacterial-classfnr.