用单个特异引物扩增桃acc氧化酶cdna及其在大肠杆菌中的表达

摘要用单个特异引物和通用引物oligo(dt)15从桃受伤叶片cdna中扩增出1.3kb左右大小的片段.将该扩增产物克隆并对重组克隆作酶切分析发现至少可分为３类.用桃acc氧化酶基因组dna为探针进行点杂交表明,4,7,9,10,11,12重组质粒能与之杂交,其中7,9,10,11,12号重组质粒酶切图谱与已报导的桃果实成熟相关的acc氧化酶cdna基因基本一致,而4号克隆则不同.dna序列分析和pcr鉴定表明,插入片段均由5′端特异引物单个引物扩增出来,对7号重组克隆插入片段dna全序列分析表明,7号重组克隆插入片段全长1146bp,包含了除启始密码子外的全部编码区和192bp的3′端非编码区.通过补上起始密码子atg构建重组表达载体,在大肠杆菌中表达出35×103的非融合蛋白.